Visualizzazione intravitale dei linfociti intraepiteliali gamma delta

I

linfociti intraepiteliali gamma delta, γδ IEL, sono cellule T migratorie specializzate che esprimono recettori delle cellule T gamma delta. Queste cellule si trovano prevalentemente all'interno dell'epitelio intestinale e pattugliano l'epitelio per limitare la traslocazione dei patogeni nell'intestino.

Per visualizzare i γδ EIL all'interno di un organismo vivente, iniziare con un topo transgenico anestetizzato con un intestino tenue parzialmente esposto. Il topo transgenico è geneticamente modificato per esprimere proteine reporter – proteine fluorescenti verdi potenziate – esclusivamente in γδ IEL, consentendone il tracciamento.

Utilizzando un elettrocauterizzazione, creare una linea di perforazione sull'intestino tenue esposto lungo la superficie anetimesenterica, prevenendo un sanguinamento eccessivo.

Praticare un'incisione longitudinale sulla linea di perforazione per esporre la mucosa intestinale, mostrando più proiezioni simili a dita: villi. Ogni villo contiene cellule epiteliali con γδ EIL residenti che sporgono nel lume intestinale.

Posizionare il mouse con la superficie mucosa esposta direttamente a contatto con il colorante fluorescente, conferendo fluorescenza rossa a