JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:50 min. • July 8th, 2025
Le microparticelle cellulari sono vescicole legate alla membrana di dimensioni submicroniche che racchiudono biomolecole rilasciate dalla membrana plasmatica di cellule eucariotiche in fase di apoptosi.
Per generare microparticelle derivate dai linfociti T, LMP in vitro, prelevare un pallone di coltura contenente coltura di linfociti T. Aggiungere actinomicina-D, un antibiotico. Incubare per una durata adeguata.
L'actinomicina-D entra nei linfociti e trasloca nel nucleo. Si intercala tra specifiche coppie di basi del DNA, inibendo la trascrizione. Questo porta all'arresto del ciclo cellulare e attiva la via apoptotica.
All'inizio dell'apoptosi, la caspasi-3 attivata si scinde e attiva la chinasi rho-associata, ROCK1. ROCK1, a sua volta, fosforila le sue proteine bersaglio a valle, causando la contrazione dell'actomiosina, che porta al blebbing della membrana e al successivo rilascio di LMP contenenti i componenti citosolici e nucleari nel mezzo.
Le cellule alla fine vanno incontro ad apoptosi.
Dopo l'incubazione, trasferire il terreno di coltura in una provetta nuova. Centrifuga per pellettare i linfociti T. Trasferire il surnatante in un tubo nuovo.
Centrifugare per rimuovere i de
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