Marcatura dei linfociti T helper murini utilizzando anticorpi monoclonali radiomarcati
JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:28 min • July 8th, 2025
Per radiomarcare il T helper murino, i linfociti Th portatori di un recettore delle cellule T, TCR, specifico per il peptide dell'ovoalbumina di pollo, prelevano una provetta contenente anticorpi monoclonali radiomarcati, mAbs, con l'attività radioattiva desiderata.
L'anticorpo monoclonale è costituito da un anticorpo monoclonale murino specifico per il TCR espresso sulla membrana del linfocita Th murino. Un chelante coniuga l'anticorpo monoclonale e un isotopo di rame che emette positroni, formando un complesso stabile.
Diluire gli anticorpi monoclonali radiomarcati con soluzione fisiologica. Successivamente, aggiungere gli anticorpi monoclonali radiomarcati diluiti a una piastra multipozzetto contenente una sospensione di linfociti Th. Incubare brevemente.
All'interno della coltura, gli anticorpi monoclonali radiomarcati si legano ai TCR sulle membrane dei linfociti Th. Dopo l'incubazione, trasferire la sospensione cellulare in una provetta nuova.
centrifuga. Eliminare il surnatante contenente anticorpi radiomarcati non legati. Risospendere i linfociti Th in terreno e trasferirli in una piastra a più pozzetti. Incubare per un periodo prolungato.
Il legame radiomarcato mAb-TCR provoca il reclutamento della proteina adattatrice sul lato citoplasmatico della membrana plasmatica, a cui si legano i trischelioni di clatrina e formano una fossa rivestita di clatrina.
Le proteine accessorie aiutano a staccare la vescicola dalla membrana plasmatica, facilitando l'internalizzazione del complesso mAb-TCR radiomarcato nel citoplasma. Alla fine, i TCR vengono riespressi sulle membrane dei linfociti Th.
I linfociti Th radiomarcati sono pronti per ulteriori esperimenti.
Per la radiomarcatura delle cellule TH1 specifiche per l'ovoalbumina di pollo, utilizzare prima un calibratore di dose per aspirare 37 megabecquerel dell'anticorpo radioattivo specifico per le cellule T di interesse, in una siringa senza volume morto.
Quindi, erogare l'anticorpo in una tazza di reazione e misurare e sottrarre la quantità rimanente di reattività nella siringa dalla quantità prelevata. Quindi, aggiungere un millilitro di soluzione salina alla tazza per generare una soluzione di 37 megabecquerel per millilitro.
Successivamente, aggiungere due volte 10 alla sesta cellula OVA-TH1 in 0,5 ml di terreno completo a ciascun pozzetto di una piastra da 48 pozzetti, seguito da 20 microlitri della soluzione di anticorpi radiomarcata. Dopo 30 minuti in un incubatore per colture cellulari a 37 gradi Celsius e 7,5% di anidride carbonica, riunire le cellule radiomarcate in una provetta conica da 50 millilitri per due lavaggi in 10 millilitri di PBS a 37 gradi Celsius.
Panoramica
Questo articolo descrive un metodo per la marcatura radioattiva di linfociti T helper murini che esprimono un recettore per cellule T specifico per il peptide della ovoalbumina di pollo. Il processo prevede l'uso di anticorpi monoclonali marcati radioattivamente per facilitare l'internalizzazione del complesso TCR nel citoplasma dei linfociti.
Componenti Chiave dello Studio
Area della Scienza
- Neuroscienze
- Immunologia
- Biologia Cellulare
Sfondo
- I linfociti T helper svolgono un ruolo cruciale nella risposta immunitaria.
- Le tecniche di marcatura radioattiva sono essenziali per il tracciamento e lo studio delle interazioni cellulari.
- La comprensione della dinamica del TCR può fornire informazioni sul funzionamento del sistema immunitario.
- La ovoalbumina di pollo è un antigene modello utilizzato negli studi immunologici.
Scopo dello studio
- Sviluppare un metodo affidabile per la marcatura radioattiva dei linfociti T helper.
- Studiare il processo di internalizzazione dei recettori dei linfociti T (TCR) dopo il legame con anticorpi marcati radioattivamente.
- Preparare linfociti T helper marcati radioattivamente per ulteriori applicazioni sperimentali.
Metodi Utilizzati
- Preparazione di anticorpi monoclonali marcati con isotopi radioattivi specifici per i recettori dei linfociti T (TCR).
- Incubazione dei linfociti T helper con anticorpi marcati con isotopi radioattivi.
- Centrifugazione per rimuovere gli anticorpi non legati.
- Risospensione delle cellule per ulteriori esperimenti.
Risultati principali
- Legame riuscito di mAb marcati radioattivamente ai TCR sui linfociti Th.
- Internalizzazione del complesso mAb-TCR nel citoplasma.
- Riespressione dei TCR sulle membrane dei linfociti dopo l'internalizzazione.
- Preparazione di linfociti Th marcati radioattivamente per studi successivi.
Conclusioni
- Il metodo etichetta in modo efficace i linfociti Th per il tracciamento e l'analisi.
- Le informazioni ottenute da questo studio possono migliorare la comprensione della dinamica dei linfociti T.
- Questa tecnica può essere applicata in diversi contesti di ricerca immunologica.
Domande frequenti
Rilevanza Industriale del Management
L'etichettatura radioattiva dei linfociti T helper murini con anticorpi monoclonali consente un monitoraggio preciso e non invasivo del traffico delle cellule immunitarie mediante imaging PET/TC. Questa capacità supporta la validazione precoce del bersaglio e la riduzione dei rischi meccanicistici nella scoperta di farmaci focalizzata sull'immunologia. L'approccio migliora la sicurezza predittiva delle strategie di modulazione immunitaria e orienta le decisioni di portafoglio nella ricerca in immuno-oncologia e nelle malattie autoimmuni.
Applicazioni Strategiche nella Ricerca e Sviluppo in Biopharma
Scoperta Precoce e Validazione del Bersaglio
- Permette la visualizzazione diretta del traffico delle cellule T specifiche per l'antigene in vivo per la verifica di ipotesi.
- Consente la validazione funzionale di bersagli immunitari monitorando l'interazione e l'internalizzazione del recettore delle cellule T (TCR).
- Facilita la riduzione del rischio meccanicistico chiarificando la risposta cellulare al legame dell'anticorpo.
- Migliora l'affidabilità predittiva delle strategie di modulazione delle vie immunitarie.
Sviluppo di screening e saggi
- Fornisce un metodo standardizzato per generare cellule immunitarie marcate con radionuclidi per saggi successivi.
- Garantisce riproducibilità e valutazione quantitativa delle interazioni tra anticorpi e cellule.
- Permette la preparazione di popolazioni cellulari validate per piattaforme di screening basate sull'imaging.
- Consente una valutazione affidabile degli effetti dei composti sul traffico delle cellule immunitarie.
Ricerca Translazionale e Preclinica
- Allinea i risultati delle analisi di imaging preclinico alla dinamica delle cellule immunitarie rilevante per la malattia.
- Consente una continuità dalla validazione in vitro al monitoraggio in vivo nei modelli animali.
- Supporta l' avanzamento di candidati mirati al sistema immunitario con valutazione del rischio.
- Fornisce dati traslazionali di biomarcatori per la localizzazione e la persistenza delle cellule immunitarie.
Integrazione di Pipeline e Flusso di Lavoro
Questo metodo di marcatura radioattiva si integra nel percorso dalla scoperta alla fase preclinica, sostenendo sia studi meccanicistici precoci che flussi di lavoro per l'imaging traslazionale.
- Biologia della scoperta: Favorisce test basati su ipotesi sul targeting e il traffico dei recettori delle cellule T.
- Screening: Consente una marcatura cellulare quantitativa e riproducibile per saggi basati su imaging.
- Analisi: Fornisce letture mediante PET/TC per confrontare la distribuzione delle cellule immunitarie in diverse condizioni.
- Ricerca traslazionale: Collega la validazione in vitro al tracciamento in vivo delle cellule immunitarie in modelli preclinici.
- Riutilizzo aziendale: Stabilisce una piattaforma riutilizzabile per la radiomarcatura di diverse popolazioni di cellule immunitarie.
Impatto Operativo ed Aziendale
- Valore scientifico: Aumenta la fiducia predittiva negli studi sul targeting e sul traffico delle cellule immunitarie.
- Valore operativo: Standardizza i flussi di lavoro di radioetichettatura e di imaging per l'analisi delle cellule immunitarie.
- Valore strategico: Fornisce indicazioni per decisioni di avanzamento o interruzione nello sviluppo di terapie immunomodulanti.
- Impatto sul portafoglio: Supporta la priorizzazione basata sulla gestione del rischio per asset in immunologia e immuno-oncologia.
Considerazioni sull'implementazione
- Richiede competenze specifiche in radiochimica e manipolazione delle cellule immunitarie.
- Necessita dell'accesso a infrastrutture per l'imaging PET/TC e la calibrazione delle dosi.
- Richiede una standardizzazione tra team per l'etichettatura cellulare e l'imaging riproducibili.
- Potrebbe essere necessaria un'adattamento per diversi tipi di cellule immunitarie o bersagli recettoriali.
- Sono essenziali protocolli di sicurezza radiologica e conformità normativa.
Domande frequenti di biotecnologie farmaceutiche
Imaging Whole-animale e di citometria a flusso tecniche di analisi di Antigen-specific CD8 + cellule T Risposte dopo nanoparticelle vaccinazione
Video correlati
0 Visualizzazioni
![Sintesi radiochimica automatizzata di [ 18 F] 3F4AP: un nuovo tracciante PET per le malattie Demyelinating di imaging](/_next/image?url=https%3A%2F%2Fcloudfront.jove.com%2FCDNSource%2Fteasers%2F55537.jpg%3Fv%3D2026-08-11T08%253A27%253A18.884Z&w=384&q=75)
Sintesi radiochimica automatizzata di [ 18 F] 3F4AP: un nuovo tracciante PET per le malattie Demyelinating di imaging
Video correlati
0 Visualizzazioni
Imaging PET/RM non invasivo in un modello murino ortotopico di carcinoma epatocellulare
Video correlati
0 Visualizzazioni
Isolare e Immunostaining linfociti e le cellule dendritiche da placche di Peyer murino di
Video correlati
0 Visualizzazioni
Induzione di Murine infiammazione intestinale per trasferimento adottivo di Effector CD4
Video correlati
0 Visualizzazioni
Immunoistochimica e multiplo etichettatura con anticorpi delle specie ospite stessi allo Studio adulti ippocampale neurogenesi
Video correlati
0 Visualizzazioni
L'isolamento e l'attivazione di linfociti murini
Video correlati
0 Visualizzazioni
Visualizzazione di IL-22 che esprimono Linfociti Utilizzando topi Reporter
Video correlati
0 Visualizzazioni
Murino linfociti Etichettatura da 64 Cu-anticorpo recettore Targeting per In Vivo Cell Traffico da PET / CT
Video correlati
0 Visualizzazioni
Quantificazione del linfocita murino traffico In Vivo e chemiotassi del monocito umano In Vitro
Video correlati
0 Visualizzazioni
Ultimo aggiornamento: 22 agosto 2026