Una tecnica in vitro per differenziare le cellule T helper produttrici di GM-CSF dalle cellule T naive

Fattore stimolante le colonie di granulociti-macrofagi, GM-CSF è secreto da cellule T helper produttrici di GM-CSF o cellule T_HGM. Queste cellule mostrano una bassa espressione di altre citochine specifiche delle cellule T helper.

Per iniziare la differenziazione in vitro delle cellule T_HGM, prendere una sospensione di cellule T helper - isolata dalla milza di topo - contenente cellule mature attivate dall'antigene e cellule naïve indifferenziate.

Aggiungere anticorpi marcati in fluorescenza che mirano ai marcatori caratteristici della superficie delle cellule naïve e mature. Eseguire lo smistamento cellulare attivato dalla fluorescenza per isolare le cellule T naive.

Placcare le cellule in un pozzetto rivestito con anticorpi che si legano al complesso del recettore delle cellule T. Aggiungere un anticorpo che si lega al recettore co-stimolatorio. Il legame sinergico attiva le cellule.

Aggiungere l'interleuchina 7 – una citochina – che induce la differenziazione nelle cellule T_HGM e la produzione di GM-CSF. Aggiungi il forbolo miristato acetato, PMA - un composto pro-infiammatorio, ionomicina - uno ionoforo di calcio e un inibitore del trasporto proteico.

La PMA entra nella cellula