Un test per studiare il ruolo della vitronectina nell'aderenza batterica alle cellule epiteliali dell'ospite
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:53 min. • July 8th, 2025
Prelevare una piastra a più pozzetti contenente monostrati di cellule epiteliali aderenti. Sostituire i terreni con terreni privi di siero, prevenendo l'interferenza delle proteine sieriche. Dopo l'incubazione, rimuovere il terreno. Lavare le celle con tampone. Aggiungere terreni freddi senza siero contenenti vitronectina. Incubare a temperature più basse.
Il dominio RGD N-terminale della vitronectina si lega ai recettori delle integrine della superficie delle cellule epiteliali. Temperature più basse inibiscono l'internalizzazione cellulare del complesso vitronectina-integrina.
Dopo la saturazione del recettore delle integrine, rimuovere il terreno. Lavare con tampone per rimuovere l'eccesso di vitronectina, che potrebbe influire sul legame batterico dell'integrina vitronectina-dipendente.
Aggiungere Haemophilus influenzae tipo f, o Hif, un patogeno batterico gram-negativo, sospensione. Incubare.
La proteina H sulla superficie di Hif si lega al C-terminale della vitronectina, facilitando l'adesione di Hif alla cellula epiteliale e la successiva internalizzazione.
Rimuovere il supporto e lavare con tampone per rimuovere l'Hif non legato. Utilizzare un enzima di distacco cellulare p
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