Una tecnica di gavage intragastrica per l'infezione controllata da Helicobacter nei topi

Per stabilire un modello di infezione da Helicobacter pylori, iniziare con un topo anestetizzato e privo di agenti patogeni. Trattenere saldamente il mouse per ridurre al minimo i movimenti durante la procedura.

Assumere una siringa riempita con una sospensione batterica. Collegare un catetere in polietilene all'ago della siringa per la sonda gastrica, una tecnica di somministrazione della sospensione direttamente nello stomaco.

Inserire il catetere al centro della bocca aperta per accedere all'esofago, un tubo muscolare che collega la bocca allo stomaco. Guidare delicatamente il catetere attraverso l'esofago fino a raggiungere lo stomaco e rilasciare la sospensione batterica direttamente nel suo ambiente acido.

I batteri inoculati secernono ureasi, un enzima che converte l'urea in ammoniaca e anidride carbonica. L'ammoniaca aumenta il pH dello stomaco, neutralizzando l'acidità e consentendo ai batteri di sopravvivere.

Questi batteri utilizzano i loro flagelli per attraversare lo strato protettivo di muco, consentendo loro di raggiungere l'epitelio gastrico, dove aderiscono alle cellule utilizzando le proteine dell'adesina. Dopo l'attaccamento, questi batteri rilasciano fattori di virulenza che interrompono le giunzioni strette tra le cellule epiteliali.

Questa disgregazione strutturale promuove l'invasione e la colonizzazione batterica nei tessuti più profondi, stabilendo infine un'infezione controllata nello stomaco.

Aggiungere sospensioni batteriche a provette di polistirene da 15 millilitri e utilizzare un anello di plastica per trasferire una gocciolina da 10 a 20 microlitri da ciascuna coltura su singoli vetrini da microscopio. Quindi, valutare la vitalità e la motilità dei batteri al microscopio a contrasto di fase con un ingrandimento di 100 volte.

Utilizzare l'inoculo di H. pylori solo se la maggior parte dei batteri ha una forma bacillare. L'inoculo di H. felis dovrebbe contenere principalmente batteri di forma elicoidale e caricare l'inoculo in singole siringhe monouso da 1 millilitro. Dotare ogni siringa di un ago calibro 23 e utilizzare una pellicola di plastica di paraffina per collegare un catetere monouso in polietilene a ciascun ago.

Successivamente, trattenere manualmente un topo di 6-8 settimane privo di agenti patogeni specifici e privo di Helicobacter per la collottola e la coda e inserire un catetere al centro della mascella aperta. Guidare il catetere in direzione caudale verso l'esofago, estendendo il collo del topo per consentire un facile accesso allo stomaco attraverso l'esofago e lontano dalla trachea fino a quando la maggior parte o tutto il catetere non è più visibile e si avverte una resistenza. Quindi, somministrare almeno 1 x 10⁵ batteri per garantire una colonizzazione ottimale nella patologia della malattia.