Perché la procedura di cateterizzazione è importante per la coerenza del modello di infezione?

La cateterizzazione standardizzata garantisce una somministrazione riproducibile dei batteri nella lume vescicale, riducendo al minimo la variabilità nell'instaurazione dell'infezione tra gli animali.

Come la tossina α-emolisina consente ai batteri di fuoriuscire dai vescicoli?

I monomeri della tossina alfa-emolisina si assemblano in complessi poro nella membrana vescicolare, consentendo ai batteri di traslocare nel citoplasma dell'ospite per la replicazione.

Cosa quantifica la formazione di comunità batteriche intracellulari in questo modello?

La formazione degli IBC viene valutata mediante microscopia o enumerazione batterica da omogenati vescicali, riflettendo la replicazione intracellulare e l'aggregazione di tipo biofilm.

Perché l'andamento dell'infezione viene monitorato nel tempo nei topi maschi?

Il monitoraggio della disseminazione batterica dagli IBC alle cellule adiacenti aiuta a valutare l'impatto terapeutico sulla diffusione e sulla persistenza dell'infezione.

Quali soglie statistiche definiscono l'instaurazione di un'infezione di successo?

Il successo dell'infezione è determinato da punteggi di qualità della somministrazione predefiniti e da misurazioni del carico batterico post-inoculazione superiori ai livelli di fondo.

Cateterismo transuretrale e inoculazione batterica per generare un modello di infezione del tratto urinario nei topi maschi

JoVE Encyclopedia of Experiments

Immunologia

0 visualizzazioni • 2:32 min • July 8th, 2025

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Prendi un topo maschio anestetizzato e inserisci un catetere nei suoi genitali.

Introdurre batteri uropatogeni nell'uretra. All'interno delle vie urinarie, il batterio si attacca alla cellula uroepiteliale.

L'interazione delle proteine di superficie batteriche con le proteine della membrana della cellula ospite induce il riarrangiamento del citoscheletro, facendo sì che la membrana della cellula ospite si avvolga strettamente attorno al batterio attraverso un meccanismo a cerniera.

Il batterio viene successivamente internalizzato all'interno di una vescicola legata alla membrana. All'interno della vescicola, il batterio produce monomeri di tossina α-emolisina che si assemblano per formare un complesso di pori nella membrana vescicolare.

Il batterio fuoriesce attraverso il complesso dei pori nel citoplasma della cellula ospite dove si replica per formare comunità batteriche intracellulari, o IBC. Gli IBC sono strutture dense, simili a biofilm, all'interno delle cellule ospiti, protette dall'attacco diretto delle cellule immunitarie presenti nello spazio extracellulare.

Quando i batteri uropatogeni maturano all'interno degli IBC, alla fine escono dalle cellule ospiti per infettare le cellule vicine, causando infezioni del tratto urinario.

Per inoculare i topi maschi, posizionare due pinze per il pollice cranialmente e caudalmente ai genitali esterni del topo. Ritrarre il prepuzio per esporre completamente il glande. Quindi, una volta posizionato esternamente il pene, rilasciare la pinza per il pollice. Riposizionare la pinza per stabilizzare il pene sporgente perpendicolarmente all'animale, tenendo l'organo delicatamente ma teso. Quindi, attraverso la piccola apertura nella punta del meato uretrale, introdurre con cura il catetere e guidarlo delicatamente nel pene usando una pinza per mantenere delicatamente la tensione.

Una volta che il mozzo del catetere incontra la punta del pene, molto lentamente, erogare 50 microlitri di inoculo mantenendo la posizione del pene. Prendere nota della qualità dell'instillazione in base a un punteggio di qualità dell'instillazione predeterminato, come quello mostrato qui. Ritrarre lentamente il catetere per 5 secondi per evitare perdite dall'inoculo. Posiziona il mouse nella sua gabbia in posizione supina. L'animale dovrebbe iniziare a riprendersi da 30 a 45 minuti dopo la somministrazione dell'anestetico.