JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:43 min. • July 8th, 2025
Per quantificare l'infiltrazione di cellule immunitarie nel tessuto vescicale di topo infetto da E. coli uropatogeno, porre il tessuto tritato in un tampone di digestione contenente collagenasi e desossiribonucleasi.
Incubare agitando regolarmente per rompere il tessuto.
La collagenasi digerisce la matrice extracellulare del tessuto, rilasciando le cellule. La desossiribonucleasi degrada il DNA libero interferente.
Dopo l'incubazione, aggiungere un tampone con un agente chelante e siero fetale bovino per inattivare gli enzimi digestivi.
Passare la miscela digerita attraverso un colino per rimuovere i detriti tissutali e il tessuto connettivo, ottenendo una sospensione unicellulare.
Centrifugare e risospendere le cellule in un tampone contenente anticorpi bloccanti Fc. Questi anticorpi si legano ai recettori Fc delle cellule immunitarie per prevenire il legame degli anticorpi non specifici.
Aggiungere anticorpi anti-CD45 marcati con fluorofori, che si legano alla proteina CD45 transmembrana sulle cellule immunitarie.
Centrifugare e far passare le cellule risospese attraverso un colino cellulare per rimuovere gli aggregati cellulari.
Utilizzando un citometro a flusso, misurare i segn
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