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Immunologia
0 visualizzazioni • 2:49 min • July 8th, 2025
Inizia con una piastra a più pozzetti contenente cellule mononucleate del sangue periferico umano, o PBMC derivate da un virus dell'immunodeficienza umana o da un donatore infetto da HIV.
Le PBMC contengono varie cellule immunitarie, tra cui le cellule T CD4-positive infette da HIV con DNA provirale integrato.
Seminare i pozzetti con una miscela di eritrociti parassitizzati da Plasmodium falciparum, o PfRBC, che esprimono antigeni derivati da parassiti, e globuli rossi non infetti.
Durante l'incubazione, gli antigeni dei PfRBC interagiscono con i recettori delle cellule immunitarie, attivandoli e rilasciando citochine.
Queste citochine innescano la segnalazione a valle nelle cellule T CD4, avviando la trascrizione del DNA provirale dell'HIV e la sintesi di nuovi RNA virali.
Gli RNA virali e le proteine dell'HIV formano particelle virali che si staccano, infettando nuove cellule T CD4 e diffondendo l'infezione da HIV.
L'infezione progressiva da HIV interrompe la secrezione di citochine, compromettendo la risposta immunitaria contro i PfRBC e portando a un'infezione persistente da malaria.
Nel corso del tempo, i globuli rossi infetti rilasciano parassiti che invadono nuovi globuli rossi, proliferando i parassiti malarici e stabilendo il modello di coltura cellulare di coinfezione malaria-HIV.
Per impostare le colture di co-infezione, iniziare seminando 1 x 106 di PBMC HIV-positivo e HIV-negativo appena isolato in 100 microlitri di RPMI-S+ per pozzetto in una piastra a 24 pozzetti. Porta il volume totale di ogni pozzetto fino a 500 microlitri con 400 microlitri di RPMI-S+.
Quindi, in triplicato e in un volume totale di 500 microlitri per pozzetto, aggiungere 3 x 106 globuli rossi non infetti o 3 x 106 globuli rossi parassitati alle cellule infette da HIV e non infette da HIV. Posizionare la piastra di co-infezione in un incubatore per colture cellulari.
Quindi, dopo l'appropriato periodo di tempo sperimentale, pellettizzare le cellule e raccogliere 700 microlitri di surnatante di coltura da ciascun pozzetto. Centrifugare il surnatante per rimuovere eventuali detriti. Quindi, aliquotare i campioni come appropriato; etichettare le provette e congelarle a meno 20 gradi Celsius o meno per un'analisi successiva.