Visualizzazione di trappole extracellulari in macrofagi da fluidi di lavaggio broncoalveolare umano

Durante l'infezione, i macrofagi alveolari rilasciano trappole extracellulari per macrofagi o MET per eliminare gli agenti patogeni.

I MET sono costituiti da fibre di cromatina complessate con peptidil arginina deiminasi, PAD, metalloproteinasi della matrice e istoni citrullinati.

Per visualizzare i MET nei macrofagi dal liquido di lavaggio broncoalveolare, centrifugare prima il fluido.

Piastra le celle risospese su vetrini coprioggetti all'interno di pozzetti a piastre multipozzetto.

I macrofagi si attaccano ai vetrini, mentre altre cellule rimangono sospese e vengono scartate.

Fissare i macrofagi, preservando la struttura cellulare. Permeabilizzarli per accedere ai bersagli cellulari.

Aggiungere proteine bloccanti, impedendo il legame di anticorpi non specifici.

Integrare con un cocktail di anticorpi primari che si lega rispettivamente agli istoni citrullinati, ai PAD e alle metalloproteinasi della matrice.

Aggiungere diversi anticorpi secondari marcati con fluorofori che si legano agli anticorpi primari bersaglio legati alla proteina MET.

Montare le celle con un mezzo di montaggio contenente DAPI. Il DAPI, un colorante fluorescente, colora le fibre di cromatina.

Utilizzando un m