JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:26 min. • July 8th, 2025
Inizia con un piatto di coltura contenente una foglia di riso con piccole ferite, esponendo l'epidermide sottostante.
Applicare una soluzione umidificante contenente Tween-20, creando un ambiente favorevole alla crescita dei funghi.
Posizionare un tappo miceliale di Magnaporthe grisea, costituito da conidiofori con conidi - spore fungine riproduttive, sul sito ferito.
Incubare la foglia in una camera umida in condizioni di fotoperiodo per favorire la crescita dei funghi.
Durante l'incubazione, i conidiofori rilasciano spore che aderiscono all'epidermide esposta, sviluppando tubi germinali.
Il tubo germinale si differenzia in un appressorio a forma di cupola, che genera un'elevata pressione di turgore, formando un'ifa affilata o piolo di penetrazione.
Il piolo di penetrazione secerne enzimi che degradano la parete cellulare, facilitandone l'ingresso nella cellula epidermica e la differenziazione in ife invasive per l'acquisizione di nutrienti.
Queste ife crescono e si diffondono all'interno delle cellule epidermiche attraverso i plasmodesmi, canali di collegamento tra le cellule e stabilendo l'infezione.
Il fungo secerne tossine, causando necrosi cellulare e formazione di lesioni vicino al sito ferito sulle foglie, indicando un'infezione fungina.
Usando un ago anatomico, raschiare tre ferite lunghe da 2 a 3 centimetri nelle vene principali delle foglie di riso staccate. Metti le foglie raschiate sugli stuzzicadenti e spruzzale con la soluzione Tween-20. Quindi, tagliare un tappo miceliale di 1/2 per 1/2 centimetro dalle piastre OTA contenenti ciascun ceppo di M griseus. Posiziona i tappi sulle foglie ferite e incubali in una camera umida a 25 gradi Celsius per 3-8 giorni.
Dopo il periodo di incubazione, esaminare e valutare le lesioni secondo il sistema di punteggio fornito dall'International Rice Research Institute. Infine, fotografare le foglie malate per valutare l'infettività dei ceppi testati.