JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:56 min. • July 8th, 2025
Prendiamo una coltura di cellule di cancro al fegato umano, geneticamente modificata per esprimere il polipeptide co-trasportatore del taurocolato di sodio o NTCP, un recettore transmembrana.
Aggiungere il virus dell'epatite B ricombinante, o HBV. Il virus comprende un involucro esterno contenente proteine di superficie e un nucleocapside interno che racchiude il genoma. L'inserimento di un gene reporter della luciferasi inibisce la capacità riproduttiva del virus.
La proteina dell'involucro virale si lega al recettore NTCP della cellula ospite.
NTCP interagisce con il recettore del fattore di crescita epidermico, EGFR, e oligomerizza, inducendo l'endocitosi del virus mediata da EGFR.
L'involucro virale si fonde con la membrana dell'endosoma per rilasciare il nucleocapside, che si disassembla nel complesso dei pori nucleari.
Il genoma virale entra nel nucleo e si converte in DNA circolare chiuso covalentemente o cccDNA – un modello stabile – che codifica per le proteine virali, inclusa la luciferasi.
A intervalli predefiniti, raccogliere le cellule e lisarle per rilasciare la luciferasi intracellulare.
Introduci un substrato reporter. La luciferasi ossida il substrato, producendo u
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