Incannulamento del dotto linfatico mesenterico in un modello di ratto per raccogliere il fluido linfatico

Inizia con un ratto intervenuto chirurgicamente con l'addome esposto.

Localizzare il dotto linfatico mesenterico superiore, che giace perpendicolarmente al rene destro e posizionato anteriormente e parallelamente all'arteria mesenterica.

Far passare una pinza diritta attraverso il letto adiposo perirenale.

Tirare una cannula linfatica attraverso il letto adiposo perirenale, posizionando un'estremità adiacente al dotto linfatico e lasciando che l'altra estremità sporga all'esterno del corpo dell'animale.

Quindi, crea una piccola incisione nel dotto linfatico.

Riempire la cannula con una soluzione anticoagulante e inserirla nel dotto linfatico.

All'interno del condotto, il fluido linfatico contiene diverse biomolecole tra cui fattori della coagulazione che innescano una cascata di eventi che portano alla formazione di coaguli.

Tuttavia, l'anticoagulante si lega ai fattori della coagulazione, inibendo la loro attività.

Ciò consente al fluido linfatico non coagulato di fluire liberamente attraverso la cannula.

Applicare un adesivo veterinario sul foro di ingresso per fissare la cannula in posizione.

Il giorno prima dell'intervento, tagliare le cannule alla lunghezza appropriata e utilizzare una lama chirurgica sterile per fare uno smusso sulla punta di ogni pezzo di tubo. Successivamente, per preparare la cannula intraduodenale, avvolgere la cannula su se stessa, quindi riscaldare la cannula per creare un punto di ancoraggio nel tubo.

Il giorno dell'intervento, radere il pelo dal lato destro dell'addome e dal collo e dalle regioni della clavicola sinistra di un ratto adulto anestetizzato, quindi pulire le regioni chirurgiche in modo asettico con tre successive soluzioni di iodio povidone e scrub all'etanolo al 70%.

Per incannulare il dotto linfatico mesenterico, posizionare l'animale con il lato destro rivolto verso l'alto e utilizzare una lama di bisturi sterile per aprire lo strato superiore della parete muscolare addominale con un'incisione diritta di quattro centimetri che si estende dal processo xifoideo al fianco destro, circa due centimetri sotto il margine costale.

Ritrarre l'intestino tenue sotto la parete addominale sinistra e utilizzare due o tre pezzi di garza sterile imbevuta di soluzione fisiologica normale per mantenerla in posizione. Quindi, collegare il ratto su una siringa di plastica da 10 millilitri posizionata orizzontalmente sotto la schiena dell'animale a livello del rene destro per aiutare nella visualizzazione del dotto linfatico mesenterico.

Localizzare il dotto linfatico mesenterico superiore, che ha un diametro compreso tra 0,5 e 1 millimetro, perpendicolare al rene destro e immediatamente rostrale e parallelo all'arteria mesenterica pulsante rosso scuro. Si noti che nei ratti non a digiuno, come mostrato qui, il dotto linfatico mesenterico superiore è bianco, opaco e più facile da visualizzare rispetto ai ratti a digiuno.

Successivamente, passare un paio di pinze diritte attraverso il letto adiposo peri-renale al margine inferiore del rene destro parallelamente al dotto linfatico mesenterico superiore e attraverso gli strati di tessuto connettivo, immediatamente sotto la vena cava. Quindi, utilizzando la punta della pinza, tirare la cannula linfatica attraverso il letto adiposo peri-renale con un'estremità immediatamente adiacente al dotto linfatico mesenterico e l'altra esternalizzata dall'animale a livello del rene destro.

Quindi, utilizzando un microscopio operatorio e una pinza da gioielliere, isolare il dotto linfatico mesenterico attraverso gli strati sovrastanti di tessuto connettivo e adiposo mediante dissezione smussata, iniziando dall'estremità inferiore e facendo attenzione a non danneggiare il dotto linfatico. Quando il dotto è stato isolato, utilizzare la punta della pinza a punta fine per praticare un piccolo foro nel dotto linfatico. Dopo essersi assicurati che la cannula linfatica sia completamente riempita con una soluzione anticoagulante e senza spazi d'aria, utilizzare un piccolo paio di pinze per inserire la cannula linfatica di circa due o quattro millimetri all'interno del dotto linfatico mesenterico tramite la puntura.

Se l'incannulamento ha successo, si osserverà un flusso graduale di linfa intestinale dall'estremità di raccolta libera della cannula. Quando ciò si verifica, posizionare una piccola goccia di colla cianoacrilica sul foro di ingresso nel dotto linfatico per fissare la cannula, facendo attenzione a non occludere il vaso con la colla in eccesso.