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Immunologia
0 visualizzazioni • 3:03 min • August 20th, 2025
Prendiamo un ratto precedentemente immunizzato con un'emulsione antigene-adiuvante contenente autoantigeni derivati dalla ghiandola lacrimale e antigeni estranei.
Reiniettare l'emulsione e iniettare intraperitonealmente la tossina della pertosse, garantendo la massima attivazione delle cellule T.
Le cellule attivate si differenziano in cellule T effettrici di memoria circolanti, TEM e cellule T di memoria residenti nei tessuti, TRM. Una percentuale di TRM risiede nei tessuti della superficie oculare.
Dopo un intervallo definito, iniettare gli antigeni nella sottocongiuntiva fornicolare e nelle ghiandole lacrimali, inducendo un'infiammazione localizzata.
Lecellule presentanti l'antigene sottocongiuntivale, APC, presentano antigeni ai TRM, innescando il rilascio di citochine.
Le citochine inducono le cellule epiteliali congiuntivali a rilasciare chemochine, che reclutano TEM.
Le APC riattivano i TEM infiltrati, innescando il rilascio di citochine proinfiammatorie.
Le citochine causano la morte delle cellule caliciformi congiuntivali che producono mucina, diminuendo i livelli di mucina e causando instabilità del film lacrimale.
Le citochine inducono la morte delle cellule della ghiandola lacrimale, riducendo la produzione di lacrime, e stimolano le cellule epiteliali corneali a produrre metalloproteinasi della matrice, danneggiando la cornea.
Valutare il ratto per le caratteristiche cliniche che indicano una corretta induzione dell'occhio secco.
Il giorno zero, distribuire 200 microlitri dell'emulsione che contiene 1 milligrammo di estratto di ghiandola lacrimale e 200 microgrammi di ovoalbumina, e completare l'adiuvante di Freund in siringhe Luer-lock da 1 millilitro e dotare le siringhe di aghi calibro 27.
Senza usare l'anestesia, iniettare per via sottocutanea l'emulsione alla base delle code di topo. Quindi, il giorno 14 in modo simile, iniettare 200 microlitri dello stesso antigene e l'adiuvante di Freund incompleto. Lo stesso giorno, iniettare per via intraperitoneale 300 nanogrammi di tossina della pertosse in 100 microlitri di PBS.
Il giorno 48, pesare la quantità richiesta di ovoalbumina e scioglierla in PBS, quindi combinare l'ovoalbumina con l'estratto di ghiandola lacrimale scongelato preparato in precedenza in questo video, creando una soluzione antigenica contenente 1 milligrammo per millilitro di ovoalbumina e 1 milligrammo per millilitro di estratto di ghiandola lacrimale.
Dopo aver anestetizzato i ratti, iniettare 5 microlitri di antigene nella sottocongiuntiva fornicile dell'occhio, quindi iniettare 20 microlitri di antigene nella ghiandola lacrimale.