JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:01 min. • July 8th, 2025
Inizia con un ratto anestetizzato che presenta sintomi di malattia autoimmune dell'occhio secco.
Applicare una quantità appropriata di colorante alla fluoresceina sulla cornea del ratto.
Chiudi e apri la palpebra del ratto per assicurarti che la fluoresceina si diffonda uniformemente sulla cornea.
Lascia che il colorante si depositi e aderisca alla cornea.
Nella malattia autoimmune dell'occhio secco, le cellule immunitarie prendono di mira e attaccano erroneamente le ghiandole lacrimali, diminuendo la produzione di lacrime.
Ciò porta all'essiccazione dell'epitelio corneale e al danneggiamento della membrana di Bowman sottostante, una zona acellulare anteriore allo stroma.
Le molecole di fluoresceina permeano attraverso le barriere corneali danneggiate per raggiungere lo strato stromale sottostante ricco di collagene.
Qui, le molecole di fluoresceina si legano al collagene, provocando la colorazione delle fibre di collagene.
Utilizzando una tecnica di imaging appropriata, acquisire immagini della cornea colorata.
Analizza il numero, l'area e l'intensità delle macchie fluorescenti verdi per misurare l'entità del danno corneale.
Utilizzare la scansione con fluoresceina per misurare il danno corneale aggiungendo 2 microlitri di fluoresceina allo 0,2% alla cornea del ratto. Con un dito guantato, apri e chiudi passivamente le palpebre del ratto tre volte per stendere il colorante fluoresceina sulla superficie dell'occhio.
Dopo 1 minuto, utilizzare una siringa da 3 millilitri per aspirare 1 millilitro di soluzione fisiologica. Quindi, posizionare la siringa a circa 2 o 3 millimetri anteriormente alla cornea e applicare delicatamente la soluzione salina sull'occhio. Con le luci di sfondo spente, acquisire immagini sotto il filtro blu cobalto di un microscopio per immagini oculari.