Colorazione con calceina acetossimetile per valutare la citotossicità cellulo-mediata natural killer nei confronti delle cellule tumorali

Per iniziare, prelevare una provetta contenente cellule tumorali in terreni privi di siero per ridurre al minimo l'interferenza dell'esterasi sierica durante il test. Incubare con colorante AM calciceina non fluorescente.

Le esterasi intracellulari attive idrolizzano la calceina AM in colorante fluorescente di calceina impermeabile alla membrana trattenuto nel citoplasma.

Piastre di cellule tumorali colorate con calceina e cellule NK effettrici nei pozzetti del test, mentre i pozzetti di controllo contengono solo cellule tumorali colorate con calceina senza cellule NK.

I recettori di superficie cellulare attivanti delle cellule NK si legano ai ligandi attivanti sulle cellule tumorali, formando una sinapsi immunitaria. Questo legame attiva la segnalazione delle cellule NK, polarizzando i granuli citotossici contenenti perforine e granzimi verso la sinapsi per il rilascio.

Le perforine formano i pori della membrana delle cellule tumorali, facilitando l'ingresso cellulare dei granzimi e avviando l'apoptosi. L'integrità compromessa della membrana provoca la perdita di calceina fluorescente, riducendo la fluorescenza delle cellule tumorali.

Cattura immagini a fluorescenza dei pozzetti.