JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:29 min. • July 8th, 2025
Inizia aggiungendo chemioattrattivi, come una chemochina, in una piastra multipozzetto.
Posizionare nel pozzetto una camera permeabile al pozzetto di dimensioni appropriate per i pori. Aggiungere la sospensione cellulare natural killer, o NK, alla camera superiore e incubare.
Alcune molecole di chemochine si diffondono attraverso la membrana e si legano ai recettori delle cellule NK. Ciò innesca vie di segnalazione che promuovono i cambiamenti del citoscheletro, con conseguente movimento cellulare direzionale verso la maggiore concentrazione di chemioattrattivo nella camera inferiore.
Dopo l'incubazione, trasferire un volume fisso di cellule migrate dalla camera inferiore a una provetta di smistamento cellulare attivata a fluorescenza o FACS. Aggiungere un numero predeterminato di microsfere fluorescenti ed eseguire il conteggio delle cellule basato su FACS.
Utilizzando la seguente formula, determinare il numero assoluto di cellule NK migrate nel campione.
Il grafico a punti fornisce il numero di perle di conteggio e cellule separate come regioni distinte, in base alle loro proprietà di fluorescenza e dispersione.
Per misurare la migrazione delle cellule NK in risposta a stimoli ch
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