JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:36 min. • July 8th, 2025
L'efferocitosi è il processo mediante il quale le cellule fagocitiche eliminano le cellule apoptotiche.
Per analizzare l'efferocitosi, ottenere timociti di topo sensibili all'apoptosi. Incubare con colorante CFSE permeabile alle cellule.
Le esterasi intracellulari scindono la CFSE in un colorante fluorescente impermeabile alle cellule, colorando i timociti. Aggiungere siero inattivato a caldo per evitare macchie eccessive.
Placcare i timociti colorati su una piastra di coltura. Aggiungere la staurosporina, un inibitore della proteina chinasi, che interrompe la cascata critica della segnalazione cellulare, inducendo l'apoptosi. Inoltre, i residui di fosfatidilserina si traslocano nel lembo esterno della membrana cellulare, funzionando come "segnali mangiami".
Aggiungere concentrazioni crescenti di timociti apoptotici a pozzetti di piastre multipozzetto contenenti macrofagi peritoneali di topo attivati, che esprimono specifiche tirosin-chinasi recettoriali.
Queste chinasi legano la fosfatidilserina esposta sui timociti apoptotici, facilitandone l'internalizzazione da parte dei macrofagi.
Dopo l'incubazione, rimuovere i timociti apoptotici fluttuanti. Aggiungere anticorpi anti-CD11b m
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