Valutazione della virulenza della Leishmania nei macrofagi in coltura

Iniziare con una piastra a più pozzetti contenente macrofagi derivati dal midollo osseo su vetrini.

Tratta i macrofagi con Leishmania promastigotes, lo stadio infettivo del parassita.

Durante l'incubazione, i parassiti interagiscono con i macrofagi, facilitando l'assemblaggio di F-actina attorno al sito di interazione.

I macrofagi inghiottono i parassiti nei fagosomi circondati da F-actina, formando vacuoli parassitofori o PV, una nicchia replicativa.

All'interno dei PV, i parassiti rilasciano fattori di sopravvivenza, aumentando l'accumulo di F-actina intorno ai vacuoli e inibendo la loro fusione con i lisosomi.

Inoltre, i parassiti regolano la produzione di epcidina, un ormone peptidico macrofagico, che inibisce il rilascio di ferro e aumenta i livelli intracellulari di ferro.

L'afflusso di ferro nei vacuoli favorisce la differenziazione dei promastigoti in amastigoti patogeni e ne facilita la moltiplicazione, aumentando la virulenza.

Dopo l'incubazione, lavare per rimuovere i parassiti liberi, quindi fissare e permeabilizzare i macrofagi infetti.

Introdurre un colorante fluorescente all'acido nucleico per colorare i nuclei di macrofagi e amastigoti infetti.

Al microscopio a fluo