JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:19 min. • July 8th, 2025
Iniziare con una sospensione di Porphyromonas gingivalis in crescita attiva, un batterio patogeno anaerobico.
Aggiungere BCECF-AM, un colorante non fluorescente e permeabile alle cellule.
Le esterasi citoplasmatiche attive idrolizzano il colorante in una forma fluorescente e impermeabile alle cellule, colorando i batteri.
centrifuga. Risospendere i batteri in mezzi anaerobici.
Aggiungere i batteri marcati a pozzetti per piastre a più pozzetti contenenti vetrini coprioggetti con cellule endoteliali umane aderenti.
Incubare in una camera anaerobica.
Le fimbrie batteriche si legano ai recettori della superficie delle cellule endoteliali, avviando cascate di segnalazione intracellulare.
Questo porta al riarrangiamento dell'actina e all'internalizzazione batterica all'interno dei fagosomi.
Dopo l'incubazione, lavare i vetrini coprioggetti con tampone per rimuovere i batteri non internalizzati.
Fissare le cellule con paraformaldeide per preservare le strutture cellulari. Permeabilizzare le cellule con un detergente non ionico per accedere ai bersagli intracellulari.
Aggiungere falloidina marcata in fluorescenza, che si lega ai filamenti di actina.
Posizionare il vetrino coprioggetti su u
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