Valutazione del porphyromonas gingivalis internalizzato nelle cellule endoteliali dell'ospite

Durante l'infezione da Porphyromonas gingivalis, le fimbrie sui batteri anaerobi si legano a specifici recettori sulle cellule ospiti.

Questo legame avvia cascate di segnalazione intracellulare, con conseguente riarrangiamento dell'actina e internalizzazione batterica all'interno dei fagosomi.

Per valutare la sopravvivenza di Porphyromonas gingivalis internalizzato all'interno di cellule endoteliali in vitro, prelevare una piastra multipozzetto contenente cellule endoteliali aderenti ai vetrini.

Aggiungere la sospensione di Porphyromonas gingivalis. Incubare per facilitare l'internalizzazione batterica.

Rimuovere il terreno e lavare utilizzando un tampone anaerobico per rimuovere i batteri non internalizzati.

Aggiungere terreni contenenti antibiotici, impermeabili alle cellule endoteliali, per eliminare i batteri attaccati alla superficie.

Incubare con un tensioattivo delicato per lisare le cellule endoteliali, rilasciando i batteri senza causarne la lisi.

Diluire il lisato raccolto con il terreno. Preparare diluizioni seriali del lisato.

Piastra le diluizioni su piastre di agar sanguigno. Incubare in condizioni anaerobiche per consentire a Porphyromonas gingivalis di crescere e fo