JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:18 min. • July 8th, 2025
Iniziare con le sottopopolazioni di macrofagi M1 e M2 aderenti, distinte dai loro specifici marcatori di superficie. Queste cellule sono infettate da Mycobacterium tuberculosis marcato con fluorescenza.
Aggiungere il buffer FACS ai pozzetti delle colture.
L'EDTA nel tampone consente il distacco delle cellule dai pozzetti di coltura.
Trasferire la sospensione cellulare in provette per microcentrifuga.
Centrifugare le provette. Scartare il surnatante. Risospendere le cellule in un cocktail di anticorpi anti-macrofagi coniugati con fluorocromo e colorante di vitalità, Zombie-UV.
Il colorante a fluorescenza Zombie-UV entra nelle cellule morte attraverso le membrane danneggiate e si lega alle proteine citoplasmatiche, consentendo una chiara differenziazione dalle cellule vitali non colorate.
Inoltre, gli anticorpi anti-macrofagi coniugati fluorescenti si legano agli antigeni bersaglio sui macrofagi, consentendo il rilevamento differenziale delle sottopopolazioni.
Lavare le cellule per rimuovere gli anticorpi non legati. Centrifuga. Rimuovere il surnatante.
Risospendere le cellule in un tampone fissativo per reticolare le proteine, preservando la morfologia cellulare e inattivando i mico
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