JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:27 min. • July 8th, 2025
Prendi una coltura di cellule tumorali con proteine citoplasmatiche marcate in fluorescenza.
Aggiungi cellule killer indotte da citochine o CIK - cellule T effettrici con caratteristiche simili a cellule natural killer - che possiedono attività antitumorale.
I recettori D o NKG2D del gruppo 2 natural killer sulle cellule CIK si legano alle proteine inducibili dallo stress sulle cellule tumorali.
Il legame induce le cellule CIK a rilasciare tossine dei granuli citoplasmatici - perforine e granzimi.
Le perforine formano pori nella membrana delle cellule tumorali, consentendo l'ingresso di granzimi, che attivano le caspasi, inducendo l'apoptosi.
Dopo l'incubazione, raccogliere le cellule. Aggiungere un colorante fluorescente per la vitalità cellulare legante l'acido nucleico.
Il colorante entra attraverso la membrana cellulare danneggiata e si lega al DNA, dando luogo a cellule morte a doppia colorazione.
Con una membrana cellulare intatta, le cellule vive sono impermeabili al colorante.
Far passare le cellule attraverso un citometro a flusso per rilevare le cellule vive che mostrano una singola fluorescenza e le cellule morte con doppia fluorescenza.
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