Saggio di adesione in vitro per rilevare l'aderenza delle cellule tumorali alle trappole extracellulari dei neutrofili

Nel microambiente del cancro, i neutrofili attivati rilasciano trappole extracellulari di neutrofili, o NET, composte da fibre di DNA extracellulare, istoni e proteine granulari, che svolgono un ruolo cruciale nella progressione del cancro.

Per studiare l'adesione delle cellule tumorali NET in vitro, aggiungere la sospensione NET ai pozzetti della piastra a più pozzetti. Incubare per la formazione del monostrato NET.

Dopo l'incubazione, rimuovere i NET non aderenti.

Aggiungere una soluzione proteica per bloccare i siti di legame liberi nei pozzetti.

Pipettare le cellule tumorali marcate in modo fluorescente su monostrati NET.

Specifici recettori di superficie sulle cellule tumorali interagiscono con i NET, facilitando l'adesione cellulare.

Dopo l'incubazione, scartare il terreno dal pozzetto di controllo negativo.

Aggiungere desossiribonucleasi per degradare i NET, staccando le cellule.

Rimuovere le soluzioni dal controllo negativo e testare i pozzetti. Utilizzare il tampone per rimuovere le cellule non aderenti.

Fissare le cellule tumorali aderenti ai NET con la formaldeide.

Utilizzando un microscopio a fluorescenza, visualizza le cellule tumorali fluorescenti aderenti ai NET.

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