Colorazione delle cellule batteriche e preparazione per studi immunologici

Inizia con una provetta contenente una coltura batterica nella fase esponenziale, garantendo batteri uniformi e in crescita attiva per risultati coerenti.

Centrifugare per raccogliere le cellule; aspirare il surnatante contenente detriti e risospendere le cellule.

Introdurre un colorante fluorescente rosso permeabile alle cellule. Le molecole di colorante penetrano nella membrana cellulare batterica e raggiungono il nucleoide, legandosi al DNA e impartendo fluorescenza rossa ai batteri.

Centrifugare per pellettare i batteri colorati e aspirare il surnatante contenente colorante non legato.

Risospendere i batteri in un mezzo di crescita per mantenere la vitalità cellulare.

Utilizzando un fotometro, misurare l'assorbanza della sospensione batterica diluita a 600 nanometri.

Confrontare il valore di assorbanza con una curva standard per determinare la concentrazione batterica.

Trasferire il volume desiderato della sospensione batterica colorata in una provetta fresca contenente un terreno di coltura. Questo per raggiungere la concentrazione batterica desiderata per l'infezione della cellula ospite che rappresenta la molteplicità dell'infezione, o MOI.

I batteri colorati con il MOI desi