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Prendi un topo anestetizzato e pre-immunizzato con Mycobacterium tuberculosis (Mtb) ucciso con il calore, che induce una risposta immunitaria e genera cellule T specifiche per Mtb.
Somministrare colliri per la dilatazione della pupilla per migliorare la penetrazione della luce per una migliore immagine dell'occhio. Applicare un gel per prevenire la disidratazione corneale.
Avvolgi il mouse in una garza per mantenere il calore corporeo e posizionalo nella tomografia a coerenza ottica o nel sistema OCT.
Visualizzare gli occhi per ottenere immagini in sezione trasversale della camera anteriore, compresa la cornea e il cristallino, e della camera posteriore, compresa la retina.
Esaminare per garantire l'assenza di infiammazione.
Iniettare Mtb ucciso dal calore nella cavità vitreale. L'immunogeno si diffonde in tutto l'occhio e innesca una risposta immunitaria, inducendo l'infiltrazione di cellule T preformate specifiche per Mtb e altre cellule immunitarie, con conseguente infiammazione chiamata uveite.
L'OCT della camera anteriore rivela cellule immunitarie infiltrate ed edema corneale, mentre l'OCT della camera posteriore indica un'infiammazione del vitreo.
Assegna un punteggio alle immagini OCT in base alla gravità dell'infiammazione per quantificare la progressione dell'uveite.
Dopo aver anestetizzato il topo, dilatare la pupilla con una goccia di fenilefrina al 2,5%, evitando che le goccioline in eccesso entrino nel naso o nella bocca. Dopo due o tre minuti, tamponare il liquido in eccesso e coprire l'occhio con gel di ipromellosa allo 0,3%. Quindi, avvolgi il topo in uno strato di garza chirurgica per mantenere il calore del corpo, quindi posiziona il mouse sulla cassetta dell'animale e posiziona la testa con la barra del morso.
Per acquisire la tomografia a coerenza ottica o le immagini OCT, accendere il sistema di imaging OCT e aprire il software di imaging. Per l'imaging della camera posteriore, avvicinare l'OCT alla superficie dell'occhio, facendo attenzione a non portare la superficie della lente a contatto con l'occhio.
Una volta posizionato correttamente l'occhio, interrompere la scansione veloce, selezionare il protocollo di scansione del volume e attivare la scansione con l'opzione Mira. Per le immagini del segmento posteriore, regolare fino a quando il nervo ottico non è centrato nell'immagine di allineamento B-Scan orizzontale e la retina è allineata con l'asse di allineamento verticale. Per le immagini del segmento anteriore, regolare la posizione per centrare l'apice della cornea sia nell'immagine di allineamento B-Scan orizzontale che nell'immagine di allineamento B-Scan verticale. Infine, fare clic su Snapshot per acquisire l'immagine di scansione del volume. Quindi fare clic su Salva.