JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:40 min. • July 8th, 2025
Prendere le cellule leucemiche nei terreni di crescita senza fattori stimolanti come le citochine e incubarle.
L'assenza di fattori stimolanti consente alle proteine fosforilate intracellulari di subire la defosforilazione e di tornare al loro stato originario.
Centrifugare e rimuovere il supporto. Risospendere le cellule nel surnatante dello stroma contenente la citochina, la linfopoietina stromale timica o TSLP.
Il TSLP si lega al suo recettore sulla cellula leucemica, innescando la dimerizzazione del recettore.
Questo avvicina le due chinasi associate a Giano Giano, o JAK, facilitando la mutua transfosforilazione.
I JAK attivati fosforilano le code citoplasmatiche del recettore, creando siti di aggancio per il trasduttore di segnale e l'attivatore della trascrizione, monomeri STAT.
Una volta fosforilate, le STAT si dimerizzano e si staccano dal recettore per regolare i processi cellulari a valle.
Fissare le cellule per mantenere gli stati di fosforilazione delle proteine intracellulari.
Trattare le cellule con una soluzione di permeabilizzazione per aumentare la permeabilità della membrana cellulare.
Aggiungere anticorpi marcati in fluorescenza per marcare le proteine fosforilat
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