JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:51 min. • July 8th, 2025
Posiziona un topo all'interno di una camera disinfettata per garantire l'accesso alla sua coda.
Fissare la camera per ridurre al minimo il movimento del mouse.
Sterilizzare la coda e anestetizzarla.
Usando forbici chirurgiche affilate, taglia una piccola parte dalla punta della coda del topo, che contiene una rete di vasi sanguigni.
Questa procedura di taglio della coda consente la raccolta di un piccolo volume di sangue periferico.
Raccogliere il sangue in un tubo capillare eparinizzato utilizzando l'azione capillare del tubo. Il tubo eparinizzato aiuta a prevenire la coagulazione del sangue.
Utilizzando una siringa a bulbo, trasferire il sangue in una provetta rivestita di EDTA.
Capovolgere la provetta per miscelare correttamente il sangue con l'EDTA, un anticoagulante. L'EDTA lega gli ioni calcio nel sangue, impedendo la coagulazione.
Centrifugare la provetta per separare il plasma dalle cellule del sangue.
Raccogliere e trasferire lo strato superiore contenente plasma in una nuova provetta.
Conservare la provetta a temperature più basse per mantenere l'integrità dei componenti del plasma.
Per raccogliere un campione di sangue periferico, per prima cosa, posizionare delicatamente il topo in un sistema di ritenuta disinfettato per piccoli animali e fissare il tubo per ridurre al minimo i movimenti dell'animale.
Successivamente, strofinare la coda con alcol isopropilico fresco, seguito dall'applicazione di una crema anestetica topica.
Usando forbici chirurgiche molto affilate, tagliare da 0,5 a 1 millimetro dalla punta della coda e raccogliere circa 80 microlitri di sangue periferico in tubi capillari eparinizzati.
Utilizzare una siringa a bulbo per trasferire i campioni di sangue in una provetta per microtainer con EDTA di potassio marcata e capovolgere la provetta 20 volte per prevenire la coagulazione.
Dopo aver centrifugato le provette per la raccolta del sangue secondo le istruzioni del produttore, raccogliere con cura lo strato di plasma e conservare le aliquote a meno 20 gradi Celsius e aliquotare il plasma per la conservazione a meno 20 gradi Celsius.