JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 6:10 min. • July 8th, 2025
Inizia con un vetrino che trasporta una sezione di tessuto bioptico della vescica urinaria infetta deparaffinizzata e reidratata contenente batteri uropatogeni.
Introdurre sonde universali marcate in fluorescenza, un oligonucleotide complementare a singolo filamento specifico per la regione conservata dell'RNA ribosomiale batterico 16s, o 16s-rRNA.
Incubare il vetrino al buio a una temperatura elevata per un'ibridazione ottimale.
Durante l'incubazione, le sonde si ibridano esclusivamente nella regione conservata sul 16s-rRNA batterico, conferendo fluorescenza verde ai batteri.
Dopo l'ibridazione, lavare con un tampone preriscaldato per rimuovere le sonde non legate.
Colorare la sezione di tessuto con colorante Hoechst e marcatori proteici cellulari marcati con fluoroforo.
Le molecole di Hoechst si legano al DNA, colorando i nuclei di blu, mentre i marcatori marcati con fluorofori interagiscono con componenti cellulari specifici come la mucina e i filamenti di actina, conferendo fluorescenza rossa nella sezione bioptica.
Lavare il vetrino e aggiungere il supporto di montaggio alla sezione di tessuto.
Al microscopio confocale, la fluorescenza verde all'interno della sezione bioptica
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