Analisi dell'attivazione dei basofili in presenza di un allergene del test mediante citometria a flusso

Prendere le provette del citometro contenenti una miscela colorante composta da anticorpi monoclonali marcati in fluorescenza sospesi in un tampone di stimolazione.

Aggiungere concentrazioni decrescenti dell'allergene del test in diverse provette. Aggiungere anticorpi anti-IgE a una provetta per fungere da controllo positivo IgE-mediato e aggiungere tampone a un'altra provetta per il controllo negativo.

Pipettare il sangue periferico umano nelle provette. Incubare.

Se l'individuo è sensibilizzato all'allergene del test, questa esposizione fa sì che l'allergene si leghi agli anticorpi IgE allergene-specifici legati ai recettori Fc sulla superficie del basofilo.

Gli allergeni reticolano i recettori FC legati alle IgE, causando l'attivazione dei basofili.

I basofili subiscono degranulazione, rilasciando granuli intracellulari contenenti mediatori dell'infiammazione, con l'upregolazione delle molecole CD63 e CD203c.

Gli anticorpi monoclonali marcati con fluorescenza si legano rispettivamente a CD63, CD203c e CCR3 sui basofili.

Abbassare la temperatura per fermare la degranulazione dei basofili.

Aggiungere un tampone per lisi gli eritrociti e fissare le cellule.

Utilizzando un citometro