JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:43 min. • July 8th, 2025
Prendi una provetta contenente sangue umano appena prelevato e aggiungi un tampone di lisi.
Il detergente nel tampone permeabilizza la membrana cellulare, lisando le cellule e rilasciando acidi nucleici intracellulari, o NA, e nucleasi.
Gli agenti caotropici nel tampone denaturano le nucleasi, impedendo la degradazione di NA.
Aggiungere particelle di vetro magnetiche o MGP - particelle magnetiche rivestite di silice - e mescolare accuratamente.
Il basso pH del tampone protona la silice, producendo una carica positiva sulla superficie degli MGP.
I NA caricati negativamente si legano elettrostaticamente alla superficie carica, formando un complesso NA-MGP.
Sotto un campo magnetico, i complessi NA-MGP si raccolgono sul lato del tubo.
Scartare il surnatante contenente detriti cellulari e proteine.
Eseguire più fasi di lavaggio risospendendo i complessi NA-MGP in un tampone di lavaggio, applicando un campo magnetico per raccogliere i complessi e scartando il surnatante con i contaminanti rimanenti.
Risospendere i complessi in un tampone di eluizione. L'alto pH interrompe l'interazione NA-MGP, rilasciando gli NA. Gli NA eluiti sono pronti per i saggi a valle.
Per purificare gli acidi nuc
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