Imaging a super-risoluzione della formazione di sinapsi immunologiche delle cellule NK su un doppio strato lipidico supportato

Preparare un vetrino da camera con un doppio strato lipidico supportato, o SLB, composto da fosfolipidi e fosfolipidi biotinilati.

Aggiungi proteine bloccanti per prevenire interazioni non specifiche.

Introdurre la streptavidina, che si lega ai fosfolipidi biotinilati.

Aggiungere anticorpi anti-CD16 biotinilati marcati con fluorescenza, che si legano alla streptavidina immobilizzata.

Pipettare la D-biotina per prevenire il legame non specifico della streptavidina alle cellule.

Introdurre le cellule natural killer, o NK. I recettori CD16 su queste cellule si legano specificamente agli anticorpi anti-CD16 legati a SLB, formando una sinapsi immunologica.

Questo legame innesca il riarrangiamento dell'actina e la polarizzazione dei microtubuli, formando infine microcluster al centro della sinapsi contenenti anticorpi anti-CD16 legati a SLB e recettori CD16.

I granuli litici contenenti perforina si polarizzano e penetrano attraverso i filamenti di actina nella sinapsi.

Correggi le celle. Permeabilizzare le membrane e SLB.

Aggiungere la falloidina marcata in fluorescenza e gli anticorpi anti-perforina, che si legano rispettivamente ai filamenti di actina e alla perforina.

Utilizzando un m