Preparazione del campione per il saggio di citotossicità cellulo-mediata Natural Killer per l'analisi citofluorimetrica
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:40 min. • July 8th, 2025
Inizia con un pellet cellulare contenente cellule natural killer o NK e cellule bersaglio colorate in fluorescenza.
Risospendere il pellet in un mezzo adatto e incubare.
La cellula NK interagisce tramite proteine di adesione superficiale, formando una sinapsi immunologica con la cellula bersaglio.
Questo avvia la segnalazione delle cellule NK, rilasciando granuli citotossici, contenenti perforina e granzimi nella sinapsi.
La perforina, una proteina che forma i pori, crea canali nella membrana della cellula bersaglio, consentendo ai granzimi di entrare nel citoplasma.
Il granzima, una serina proteasi, interagisce con le proteine intracellulari, attivando la via apoptotica nella cellula bersaglio.
Ora, aggiungi il colorante fluorescente allo ioduro di propidio.
Il colorante entra nelle cellule morte attraverso le loro membrane danneggiate e si lega al DNA intercalandosi tra le sue coppie di basi.
Di conseguenza, le cellule morte esprimono il doppio fluorocromo mentre le cellule vive esprimono un singolo fluorocromo.
Il campione è pronto per la citometria a flusso per valutare la citotossicità indotta dalle cellule NK quantificando il numero di cellule bersaglio morte e vive.
Per prep
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