Un test per misurare la citotossicità indotta chimicamente in fette di polmone umano tagliate con precisione

Prelevare una piastra multipozzetto contenente fette di polmone umano tagliate con precisione, che mantengono la microarchitettura polmonare nativa.

Rimuovi i supporti. Aggiungere concentrazioni crescenti di agente di prova ai pozzetti e incubare.

A seconda del suo potenziale citotossico, l'agente in esame distrugge le membrane cellulari, inducendo la morte cellulare e riducendo le cellule vitali all'interno delle fette.

Dopo l'incubazione, rimuovere il terreno. Immergere le fette in un terreno contenente sale di tetrazolio solubile in acqua, o WST-1, e un reagente di accoppiamento elettrone.

incubare. Nelle cellule metabolicamente attive, il sistema di trasporto degli elettroni della membrana plasmatica trasferisce gli elettroni dal NADH intracellulare al reagente di accoppiamento elettronico extracellulare, riducendo il colorante impermeabile alle cellule WST-1 a formazano stabile, giallo scuro e solubile in acqua.

Dopo l'incubazione, agitare la piastra per distribuire uniformemente il formazan e trasferirlo in una piastra a più pozzetti.

Utilizzando un lettore di micropiastre, misurare l'assorbanza del formazano, indicativa della vitalità tissutale.

Una diminuzione dell'assorban