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Immunologia
0 visualizzazioni • 2:40 min • July 8th, 2025
Inizia aggiungendo un agente farmacologico immunomodulatore alle cellule dendritiche immature, o DC.
Le DC esprimono il complesso maggiore di istocompatibilità, o molecola MHC di classe II, e molecole co-stimolatorie, cruciali per promuovere la proliferazione delle cellule T durante le risposte immunitarie.
L'agente immunomodulatore interagisce con la DC e innesca la sottoregolazione dell'espressione delle molecole MHC di classe II e co-stimolatorie, convertendo così la DC in una cellula dendritica tollererogenica o TolDC.
Co-coltura di TolDC con cellule T CD4+ naive.
Aggiungere un peptide antigenico alla co-coltura.
Le TolDC internalizzano il peptide, elaborando e caricando successivamente l'antigene risultante sulla molecola MHC.
La molecola MHC legata all'antigene trasloca sulla membrana cellulare.
Le cellule T CD4+ naive interagiscono direttamente con il complesso antigene-MHC sulle TolDC.
L'interazione con la molecola co-stimolatoria sulla DC matura consente la piena attivazione della cellula T naïve.
Senza co-stimolazione, la cellula T CD4+ naive rimane dormiente e non può avviare una risposta immunitaria contro l'antigene presentato.
Risospendere le cellule a una concentrazione di 2 x 105 cellule dendritiche per millilitro e trattarle con l'appropriata concentrazione sperimentale del triterpenoide di interesse per 1 ora a 37 gradi Celsius.
Durante l'ultimo terzo dell'incubazione, risospendere le cellule T a una concentrazione di 1 x 107 cellule per millilitro e 1 CFSE micromolare per 15 minuti a 37 gradi Celsius. Quindi, lavare le cellule con PBS e regolare nuovamente il volume fino a una concentrazione finale di 2 x 106 cellule T per millilitro.
Co-coltura di 100 microlitri di cellule dendritiche trattate con 100 microlitri di cellule T CD4 CD4-positive marcate con CFSE in ciascun pozzetto di una piastra a 96 pozzetti e aggiunta di 100 nanogrammi per millilitro di peptide OVA 322-329 alle cellule, misurando l'intensità CFSE delle cellule T mediante citometria a flusso dopo 2 o 3 giorni di incubazione.