JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:54 min. • July 8th, 2025
Assumere gli splenociti impoveriti di globuli rossi in un tampone contenente un colorante fluorescente sensibile al calcio performato nelle cellule, l'Indo-1 AM.
Le esterasi intracellulari scindono l'Indo-1 AM in Indo-1 impermeabile alla membrana, che si lega agli ioni calcio, cambiando il segnale di fluorescenza dell'Indo-1 dal blu al viola.
Introdurre anticorpi antigene-specifici coniugati con fluorofori che si legano specificamente ai rispettivi antigeni sulle cellule.
Utilizzando la citometria a flusso, identificare le cellule B marcate con fluorofori e misurare il loro rapporto di fluorescenza viola-blu Indo-1.
Ora, trattare le cellule con liposomi antigenici che comprendono frammenti di IgM Fab coniugati a doppi strati liposomiali.
I recettori delle cellule B si legano agli antigeni accoppiati ai liposomi, attivando le tirosin-chinasi citoplasmatiche associate e innescando l'attivazione della fosfolipasi-C gamma-2.
La fosfolipasi-C attivata scinde il fosfolipide di membrana, il fosfatidilinositolo 4,5-bisfosfato, generando secondi messaggeri, tra cui l'inositolo 1,4,5-trisfosfato o IP3.
IP3 si lega ai canali del calcio IP3-dipendenti sul reticolo endoplasmatico, rilasciando i
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