Una tecnica di cromatografia ad esclusione dimensionale per purificare le vescicole extracellulari micobatteriche
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:38 min. • July 8th, 2025
Prelevare una colonna per cromatografia ad esclusione dimensionale impacchettata con una matrice inerte di particelle di resina polisaccaridica. Le particelle porose hanno una dimensione dei pori definita.
Lavare la colonna con un tampone di equilibratura per una purificazione ottimale.
Aggiungere un filtrato di coltura concentrato elaborato da una coltura di Mycobacterium tuberculosis , un batterio patogeno. Il filtrato contiene vescicole extracellulari, o EV, e altre proteine solubili secrete dai batteri.
Le vescicole extracellulari sono strutture sferiche di dimensioni eterogenee, piccole. Contengono macromolecole e fattori di virulenza racchiusi in un doppio strato lipidico.
Il campione entra nella matrice per gravità. Aggiungere il buffer per consentire lo spostamento del campione attraverso la colonna.
Le vescicole extracellulari non possono entrare nella resina a causa delle piccole dimensioni dei pori e si muovono invece attraverso lo spazio interparticellare, percorrendo un percorso più breve ed eluendo per prime.
Le proteine, avendo una dimensione più piccola, entrano nei pori, percorrono un percorso più lungo attraverso la resina ed eluiscono alla fine.
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