Una tecnica zWEDGI per visualizzare le larve di pesce zebra infettate da agenti patogeni fungini

Inizia con larve di pesce zebra transgenico che esprimono cellule immunitarie marcate con fluorescenza contrassegnate con marcatori fluorescenti unici per un tracciamento preciso.

Le larve sono pre-iniettate con una proteina fluorescente rossa che esprime spore di Aspergillus, nel loro rombencefalo.

All'interno del rombencefalo, le spore fungine imitano l'infiammazione locale e attirano le cellule immunitarie, compresi i macrofagi, che fagocitano le spore per la loro eliminazione.

Mentre alcune spore persistono e germinano in ife, rilasciando molecole derivate da agenti patogeni e attirando i neutrofili verso il sito di infezione.

Trasferire una larva anestetizzata nella camera di carico a medio contenuto del dispositivo di ferita e intrappolamento del pesce zebra per la crescita e l'imaging, o zWEDGI, dispositivo interconnesso alla camera di ferita tramite un canale di restrizione.

Fissare la larva all'interno del canale di restrizione con orientamento dorso-laterale per l'imaging del rombencefalo.

Nelle fasi iniziali, la fluorescenza rossa rappresenta le spore fungine, mentre la fluorescenza verde conferma il reclutamento dei macrofagi nel sito di infezione.

Nel tempo, la diffusi