JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:54 min. • July 8th, 2025
Inizia rivestendo un coprioggetto con poli-L-lisina biotinilata per creare una superficie ricca di biotina.
Successivamente, introduci la streptavidina, una proteina che si lega alla biotina, formando un ponte molecolare per le interazioni successive.
Successivamente, aggiungere peptidi biotinilati in gabbia fotogenica legati ai principali complessi di istocompatibilità, pMHC, insieme a molecole di adesione.
I ligandi biotinilati del pMHC e le molecole di adesione interagiscono con regioni specifiche della streptavidina, consentendone l'immobilizzazione.
Quindi, lavare ripetutamente il vetro coprioggetto con soluzione fisiologica tamponata e introdurre le cellule T.
La presenza di una fotogabbia, un gruppo chimico sensibile alla luce legato a un residuo specifico sul peptide, ostacola il legame spontaneo del recettore delle cellule T al peptide.
Per un'attivazione controllata delle cellule T, esporre i peptidi fotogabbiati alla luce ultravioletta.
La luce UV rompe il legame chimico tra il complesso fotogabbia-peptide, esponendo la forma nativa del peptide.
I recettori delle cellule T identificano e si attaccano ai peptidi esposti, mentre le integrine si legano alle molecole di ades
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