Un metodo di localizzazione in immunofluorescenza in vivo per studiare la biodistribuzione degli anticorpi

Prendiamo un modello murino di cancro al seno. I tumori della ghiandola mammaria comprendono cellule tumorali, fibroblasti associati al cancro, adipociti, cellule immunitarie e vascolarizzazione tumorale.

Iniettare per via endovenosa anticorpi specifici per il tumore coniugati con fluorofori.

Dopo aver raggiunto il sistema vascolare tumorale, gli anticorpi si legano alle proteine transmembrana specifiche del tumore sull'endotelio del vaso e sulle cellule tumorali vicine.

Isolare chirurgicamente la ghiandola mammaria e immergerla in un mezzo di congelamento.

Ottenere le criosezioni su un vetrino e risciacquare con un tampone per rimuovere il mezzo di congelamento.

Fissare le sezioni per preservare l'architettura dei tessuti. Applicare un detergente per migliorare l'immunocolorazione e una soluzione bloccante per prevenire il legame di anticorpi non specifici.

Introdurre un anticorpo primario specifico per le molecole di adesione sull'endotelio dei vasi sanguigni e un anticorpo secondario coniugato con fluorofori che si lega all'anticorpo primario, marcando il sistema vascolare.

Aggiungere un mezzo di montaggio sul vetrino e posizionare un vetrino coprioggetti.

Al microscopio confoca