Misurazione citofluorimetrica quantitativa della fagocitosi delle spore fungine da parte dei fagociti umani

Prelevare una piastra a più pozzetti contenente una sospensione di leucociti umani. Aggiungere spore fungine patogene marcate con FITC.

Durante l'incubazione, le spore si gonfiano e rompono il loro rigido strato proteico idrofobico, esponendo i polisaccaridi della parete cellulare riconosciuti da specifici recettori di riconoscimento dei pattern sulle cellule fagocitarie.

Questo legame innesca vie di segnalazione intracellulari, portando al riarrangiamento dell'actina e all'internalizzazione delle spore all'interno dei fagosomi.

A seconda dello stato di attivazione dei fagociti, alcune spore rimangono aderenti alle cellule senza internalizzazione.

Dopo l'incubazione, raccogliere le cellule e trasferirle in una nuova provetta.

centrifuga. Risospendere le cellule in un tampone e trasferirle su una piastra con fondo a V a più pozzetti.

Introdurre anticorpi anti-FITC marcati con fluorofori che si legano alle molecole FITC esposte sulle spore aderenti, controcolorandole.

centrifuga. Risospendere le cellule in un tampone e trasferirle in provette per citometro a flusso.

Eseguire la citometria a flusso per differenziare tra spore internalizzate e aderenti alle cellule.

I fagociti contenen