JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:59 min. • July 8th, 2025
Prendi il Mycobacterium bovis BCG, un batterio attenuato che causa la tubercolosi, e iniettalo per via intradermica in un topo.
Una risposta infiammatoria contro i batteri forma un granuloma che comprende batteri, macrofagi epitelioidi, macrofagi convenzionali e linfociti.
Eseguire la risonanza magnetica o la risonanza magnetica. Il campo magnetico allinea i protoni orientati in modo casuale nel tessuto nella sua direzione.
Applicare un impulso a radiofrequenza perpendicolare al campo magnetico. I protoni assorbono energia dall'impulso e si inclinano lontano dal campo.
Quando l'impulso si ferma, i protoni emettono l'energia assorbita, chiamata decadimento a induzione libera o FID, e si riallineano con il campo.
Misurare il segnale FID per ottenere un'immagine. La durata della carie è specifica del tessuto e le aree con una carie più lunga appaiono più chiare.
Prelevare nanosonde superparamagnetiche coniugate ad anticorpi policlonali specifici per Mycobacterium e iniettarle per via endovenosa.
Gli anticorpi si legano a più epitopi sui batteri, marcando il granuloma.
Le nanosonde accorciano il decadimento dei protoni vicini per far apparire il granuloma più scuro, confermando l'infezione micobatterica.
Per inoculare negli animali da esperimento M. bovis BCG, in primo luogo, ricostituire il vaccino liofilizzato, o ceppo batterico, nel terreno di Sauton, e diluire la soluzione madre ricostituita con soluzione fisiologica. Successivamente, caricare 100 microlitri di soluzione in una siringa da 1 millilitro per animale e iniettare l'intero volume di batteri, per via intradermica, nella pelle scapolare dorsale sinistra o destra di ciascun topo.
Per la risonanza magnetica in vivo di animali iniettati con nanosonda viva, acquisire immagini ecografiche a rotazione rapida pesate in T2 al basale di ciascun animale da esperimento anestetizzato, prima di iniettare due nanomolari di sonde anticorpali SPIO-Tb, sospese in 200 microlitri di soluzione fisiologica nella vena caudale di ciascun topo. Quindi, eseguire nuovamente l'imaging degli animali, subito dopo l'iniezione e ogni cinque minuti per i successivi 30 minuti.
Al termine della sessione di imaging, analizzare quantitativamente le immagini di risonanza magnetica, utilizzando l'intensità del segnale come misura delle regioni di interesse definite in posizioni comparabili di un centro di granuloma di M. tuberculosis e del muscolo posteriore adiacente a un'area granulomatosa. Quindi, utilizzare la formula per calcolare i miglioramenti relativi del segnale, utilizzando la misurazione dell'intensità del segnale prima e, da zero a tre ore, dopo l'iniezione degli agenti di contrasto.