Un virus dell'influenza reporter fluorescente luciferasi per tracciare le infezioni virali

Inizia con un virus influenzale ricombinante patogeno con un genoma modificato per incorporare geni reporter compatti.

Questi geni reporter codificano per un piccolo enzima bioluminescente luciferasi e una proteina fluorescente monomerica.

Inoculare il virus per via intranasale in un topo anestetizzato, adeguatamente rasato per il successivo imaging.

Il virus entra nella cellula ospite e rilascia il suo contenuto genetico.

All'interno del nucleo, il genoma virale si trascrive in molecole di mRNA e successivamente si traduce per produrre luciferasi e proteina fluorescente nella cellula ospite.

Iniettare un substrato di luciferina per via retro-orbitale nel topo.

L'enzima luciferasi ossida la luciferina in ossiluciferina, che al rilassamento emette un segnale bioluminescente.

Misura il segnale per stimare i livelli di luciferasi, consentendo il monitoraggio dell'infezione virale in un animale vivo.

Per l'analisi ex vivo, asportare i polmoni e catturare il segnale di fluorescenza attraverso un'adeguata tecnica di imaging.

A differenza delle varianti regolari, le proteine fluorescenti monomeriche non formano aggregati, fornendo un'immagine chiara per tracciare accuratamente l'infezione