Un test per valutare la fagocitosi e l'attività di burst ossidativo nei granulociti e nei monociti

Iniziare con provette contenenti sangue intero umano, compresi i globuli rossi, o globuli rossi, e globuli bianchi, o WBC, come monociti e granulociti, e altre cellule del sangue.

Introdurre il diidroetidio, un indicatore di superossido, e batteri non marcati in una provetta. Trattare l'altra provetta con batteri verdi marcati con fluoroforo.

I granulociti e i monociti interagiscono con le molecole associate ai patogeni dei batteri, inghiottendendole all'interno dei fagosomi.

Questo attiva l'enzima della membrana fagosomiale NADPH ossidasi, riducendo l'ossigeno molecolare a un anione superossido.

L'anione superossido produce inoltre perossido di idrogeno, una specie reattiva dell'ossigeno, o ROS, con conseguente esplosione ossidativa.

All'interno del fagosoma, i ROS ossidano il diidroetidio per formare 2-idrossi etidio, che colora il DNA batterico, conferendo una fluorescenza rossa.

Introdurre un quencher, per spegnere la fluorescenza extracellulare.

Aggiungi una soluzione di lisi, eliminando la potenziale interferenza dei globuli rossi, e correggi i globuli bianchi.

Nella citometria a flusso, le cellule con fluorescenza verde confermano l'attività fagocitaria dei granulociti e dei