Un test per quantificare la fagocitosi mediata da anticorpi di eritrociti infetti da parassiti

Prendi gli eritrociti infetti da Plasmodium falciparum. Etichettare il DNA del parassita con un colorante fluorescente per la visualizzazione del parassita.

Incubare questi eritrociti infetti da parassiti con sieri di individui esposti alla malaria. Queste cellule mostrano antigeni parassiti sulla loro superficie, che si attaccano agli anticorpi IgG umani acquisiti naturalmente nei sieri, opsonizzando le cellule per la fagocitosi.

Trasferire gli eritrociti infettati da parassiti opsonizzati in una piastra multipozzetto rivestita di proteine contenente una sospensione di monociti di derivazione umana o cellule fagocitiche.

Durante l'incubazione, i recettori Fc-gamma sui monociti interagiscono con gli eritrociti opsonizzati IgG, innescando l'inghiottimento degli eritrociti nei fagosomi.

Dopo l'incubazione, centrifugare la piastra per prevenire ulteriori interazioni cellulari e fermare la fagocitosi.

Scartare il surnatante. Trattare con soluzione licante di cloruro di ammonio, rompendo selettivamente gli eritrociti infetti non fagocitati senza intaccare i monociti.

Aggiungere un tampone contenente siero per arrestare il processo di lisi. Centrifugare ed eliminare il surnatante contene