Un test in vitro per studiare la citotossicità delle cellule T CD8⁺ pre-attivate contro le cellule tumorali

Prendiamo due popolazioni di cellule T CD8⁺: le cellule T effettrici CD8⁺ pre-attivate attraverso l'impegno mediato da anticorpi delle cellule T e dei recettori co-stimolatori e le cellule T CD8⁺ soppresse inibite dalle cellule soppresse di derivazione mieloide.

Aggiungere queste cellule T a pozzetti rivestiti di membrana basale con cellule tumorali che esprimono una proteina fluorescente a restrizione nucleare.

Pipettare un substrato fluorogenico della caspasi-3, un colorante fluorogenico legante il DNA coniugato a un peptide contenente il sito di riconoscimento della caspasi-3.

incubare. I recettori delle cellule T effettrici si legano al complesso MHC-peptide di classe I sulle cellule tumorali, innescando il rilascio di granuli citotossici contenenti perforine e granzimi.

Le perforine creano i pori della membrana delle cellule tumorali, consentendo l'ingresso dei granzimi e l'attivazione delle caspasi, avviando l'apoptosi.

Le caspasi attivate fendono inoltre il substrato della caspasi fluorogenica, rilasciando il colorante che si lega al DNA e diventa fluorescente.

Al microscopio a fluorescenza, le cellule tumorali co-coltivate con cellule T effettrici mostrano una doppia fluore