Valutazione dell'attivazione di caspasi multiple nei macrofagi
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
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Iniziare con una piastra a più pozzetti contenente macrofagi derivati dal midollo osseo aderiti.
Introdurre virus dell'influenza A che si fondono con i macrofagi, rilasciando ribonucleoproteine contenenti RNA virale.
La proteina 1 legante lo Z-DNA dei macrofagi, o ZBP1, interagisce con le ribonucleoproteine virali, innescando l'oligomerizzazione di ZBP1, con chinasi e caspasi 8.
Lo ZBP1 oligomerizzato recluta ulteriormente le proteine del sensore dell'inflammasoma, le proteine adattatrici e la procaspasi-1, formando un complesso multimerico, un PANoptosoma.
All'interno del PANoptosoma, l'iniziatore caspasi-8 si attiva attraverso la scissione di prossimità, attivando ulteriormente le caspasi effettrici, tra cui la caspasi-3 e 7.
Inoltre, le proteine sensore dell'inflammasoma all'interno del PANoptosoma attivano una cascata di segnalazione, convertendo la pro-caspasi-1 nella sua forma attiva, la caspasi-1.
Contemporaneamente, l'infezione virale induce il rilascio di citocromo-c dai mitocondri, innescando l'attivazione dell'apoptosoma e convertendo la pro-caspasi-9 nella sua forma attiva.
L'infezione virale innesca anche la via non canonica dell'inflammasoma, attivando la caspasi-11.
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