Un test di microneutralizzazione per misurare i titoli anticorpali neutralizzanti nel siero umano

Per un test di microneutralizzazione, prelevare una piastra multipozzetto contenente siero umano inattivato termicamente, diluito in serie con concentrazioni decrescenti di anticorpi neutralizzanti specifici per l'influenza.

Introdurre virus influenzali patogeni. Gli anticorpi sierici interagiscono con i virus e li neutralizzano; Tuttavia, diluizioni sieriche più elevate mostrano una neutralizzazione limitata del virus.

Seme con cellule di rene canino Madine-Darby, o cellule MDCK, che sovraesprimono residui di acido sialico umano sulla loro superficie.

Nella diluizione più elevata, i virus influenzali non neutralizzati si fondono con l'acido sialico delle cellule, rilasciando il genoma virale nel citoplasma cellulare.

I geni virali vengono trascritti e tradotti in proteine virali e nucleoproteine all'interno della cellula ospite.

Trattare con un'alta concentrazione di acetone per la fissazione e la permeabilizzazione.

Introdurre anticorpi primari che interagiscono con le nucleoproteine virali.

Sovrapposizione con anticorpi secondari coniugati con enzimi che interagiscono con gli anticorpi primari. Lavare e trattare con il substrato dell'enzima, producendo un prodotto colorante.

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