Un test per rilevare la produzione di specie reattive dell'ossigeno nei tessuti di riso dopo l'elicitazione immunitaria
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:42 min. • July 8th, 2025
Prelevare una micropiastra contenente segmenti di guaina uniformi tagliati da piantine di riso e dischi fogliari ricavati da foglie di piante di riso.
Aggiungere acqua sterile e incubare durante la notte per consentire il recupero dallo stress della ferita.
Aggiungere un peptide immunogenico derivato da flagelli batterici che agisce come pattern molecolare associato a patogeni o PAMP.
Le cellule vegetali ai bordi tagliati si legano ai PAMP tramite recettori di riconoscimento dei modelli.
Il legame innesca la segnalazione a valle, attivando un enzima localizzato nella membrana plasmatica chiamato omologo della burst ossidasi respiratoria o RBOH.
L'RBOH attivato produce specie reattive dell'ossigeno o ROS nell'apoplasto, lo spazio intercellulare. I ROS prodotti vengono convertiti in perossido di idrogeno.
Aggiungere un enzima perossidasi e un substrato chemiluminescente.
La perossidasi utilizza il perossido di idrogeno per convertire il substrato in uno stato intermedio eccitato, che rilascia energia sotto forma di luce e ritorna allo stato fondamentale.
Misurare la luminescenza in entrambi i tipi di tessuto per rilevare un forte aumento subito dopo il trattamento PAMP, che indica un
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