Misurazione dell'alloreattività in una popolazione mista di cellule T

Inizia con una piastra a più pozzetti contenente cellule dendritiche di topo, o DC che trasportano alloantigeni o varianti genetiche di autoantigeni.

Introdurre le cellule T di topo, comprese le cellule T alloreattive che non sono reattive agli autoantigeni, riconoscendo gli antigeni estranei.

Le cellule T alloreattive riconoscono questi alloantigeni e interagiscono con le DC, innescando il riarrangiamento del citoscheletro, inclusa la riorganizzazione della F-actina.

Questo promuove i recettori sulle cellule T a impegnarsi con le molecole co-stimolatorie sulle DC, formando una connessione cellulare, una sinapsi immunologica.

Fissare le cellule, trasferirle in una provetta e introdurre un cocktail di anticorpi marcati con fluorocromo specifici per le cellule T e i recettori DC, conferendo una fluorescenza distinta.

Rimuovere gli anticorpi non legati e risospendere le cellule in un tampone contenente un agente permeabilizzante che permeabilizza le cellule e marcatori proteici verdi marcati con fluorofori che si legano alla F-actina.

Centrifugare e risospendere le cellule in un tampone contenente colorante nucleare, colorando i nuclei di rosso.

Utilizzando la citometria a flusso di i